PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

Enzootic bovine leukosis (EBL) is an infectious disease caused by bovine leukemia virus (BLV) that affects cattle worldwide. Agar gel immunodiffusion (AGID) was the reference test for EBL diagnosis for many years, but enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) showed higher sensitivity, was faster to perform, and resulted in an objective reading. However, the importation of ELISA kits is lengthy and expensive, and currently, no AGID kits are available in Brazil. The aim of this work was to standardize an indirect ELISA (iELISA) for EBL diagnosis using BLV antigens produced in Tadarida brasiliensis lung (Tb1Lu) cells, which are Bovine viral diarrhea virus (BVDV) free, unlike fetal lamb kidney (FLK) cells, currently used for this purpose. Following standardization, iELISA results were compared with those obtained by AGID and the commercial Chekit Leucose-Serum ELISA. Compared to AGID, iELISA had 94,44% sensitivity, 75.68% specificity, 79.10% positive predictive value (PPV) and 93.30% negative predictive value (NPV), with 84% concordance and a Kappa index of 0.699. Compared to the Chekit Leucose-Serum ELISA, iELISA showed 92.60% sensitivity, 87.09% specificity, 90.27% PPV and 90,00% NPV, with 90.27% concordance and a Kappa index of 0.801. Taking into account the high agreement with the traditional tests and the absence of non-specific reactions with BVDV, the developed assay could be used as diagnostic method to control EBL in Brazil.

• iELISA bovine enzyme-linked immunosorbent assay Enzootic bovine leukosis diagnosis control cattle

Abstract in Portuguese:

A leucose enzoótica bovina (LEB) é uma doença infecciosa natural dos bovinos com distribuição mundial causada pelo “bovine leukemia virus” (BLV). A imunodifusão em gel de ágar (IDGA) foi considerada por muitos anos o teste de eleição, porém ensaios imunoenzimáticos (ELISA) apresentam sensibilidade mais elevada e leitura mais rápida e objetiva. No entanto, a importação de kits de ELISA é um processo dispendioso e demorado, e atualmente não há kits de IDGA comercialmente disponíveis no Brasil. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi padronizar um ELISA indireto (iELISA) para diagnóstico da LEB utilizando antígenos produzidos a partir do cultivo do BLV em linhagem celular Tadarida brasiliensis “lung” (Tb1Lu) livre de “bovine viral diarrhea virus” (BVDV), diferentemente do que acontece com as linhagens “fetal lamb kidney” (FLK) atualmente utilizadas na produção desses antígenos para uso em ensaios sorológicos. Após a padronização do iELISA, os resultados foram comparados com aqueles obtidos por IDGA e pelo ELISA comercial “Chekit Leucose-Serum”. Comparado ao IDGA, o iELISA apresentou 94,44% de sensibilidade, 75,68% de especificidade, valor preditivo positivo (VPP) de 79,1% e valor preditivo negativo (VPN) de 93,3%, com concordância entre os testes de 84% e o índice Kappa 0,699. Quando comparado ao ELISA “Chekit Leucose-Serum”, o iELISA apresentou sensibilidade de 92,6%, especificidade de 87,09%, VPP de 90,27% e VPN de 90%, com concordância de 90,27% e o índice Kappa 0,801. Portanto, devido à alta concordância com os testes tradicionais e ausência da ocorrência de reações inespecíficas com BVDV, o ensaio desenvolvido pode ser utilizado como ferramenta diagnóstica para o controle da LEB no Brasil.

• iELISA bovinos ensaio de imunoadsorção enzimática leucose enzoótica bovina diagnóstico controle

Abstract in English:

ABSTRACT.- Panziera W., Bianchi R.M., Galiza G.J.N., Pereira P.R., Mazaro R.D., Barros C.S.L., Kommers G.D., Irigoyen L.F. & Fighera R.A. 2014. [Epidemiological, clinical and pathological aspects of lymphoma in cattle: 128 cases (1965-2013).] Aspectos epidemiológicos, clínicos e anatomopatológicos do linfoma em bovinos: 128 casos (1965-2013). Pesquisa Veterinária Brasileira 34(9):856-864. Departamento de Patologia, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: anemiaveterinaria@yahoo.com.br The epidemiological, clinical and pathological aspects of 128 cases of bovine lymphoma are described in this study. Out of the cases were the gender was informed (n=111), 84.7% of affected animals were females and 15.3% were males. Out of the cases were breed was informed (n=108), 63% of affected animals were Holstein cows. The age of affected cows (n=107) varied from 1 to 14 years (57.9%), with most animals being adults (89.7%) with 5 to 8 years of age (57.9%). The most common clinical sign (n=89) was lymphadenomegaly (74.1%). Other clinical signs associated with the respiratory system (dyspnea, pulmonary stridor, and tachypnea), cardiovascular system (tachycardia, subcutaneous edema, and positive venous pulse), digestive system (ruminal atony, bloat, and diarrhea), and nervous system (pelvic limb paresis and staggering pace) were less prevalent. Gross findings (n=125) included enlargement of lymph nodes in 71.2% of the cases; this finding was classified as localized in 89.6% of the cases and generalized in 10.3% of the cases. Out of the cases where the affected lymph nodes were identified (n=58) the distribution of the lymphadenomegaly was the following: mesenteric (51.7%), mediastinal (37.9%), prescapular (29.3%), internal iliac (27.6%), superficial inguinal (25.8%), and tracheobronchial (18.9%). Other commonly affected organs included heart (40%), liver (15.2%), kidney (14.4%), abomasum (12.8%), uterus (11.2%), intestine (10.4%), and lung (7.2%). Tumor masses within the vertebral canal were observed in a few cases (3.2%). Based on the epidemiology and localization of the lesions, the majority of the cases (96%) in this study were classified as enzootic lymphoma (96%) and the remainder of the cases (4%) as sporadic lymphoma. The results herein presented will serve as a guide to large animal practitioners and veterinary pathologists and will help in the confirmation of their suspicion when dealing with cases of bovine lymphoma.

• Leucosis lymphoma lymphosarcoma hematopoietic tumors leucose enzoótica bovina linfoma linfossarcoma tumores hematopoiéticos

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Panziera W., Bianchi R.M., Galiza G.J.N., Pereira P.R., Mazaro R.D., Barros C.S.L., Kommers G.D., Irigoyen L.F. & Fighera R.A. 2014. [Epidemiological, clinical and pathological aspects of lymphoma in cattle: 128 cases (1965-2013).] Aspectos epidemiológicos, clínicos e anatomopatológicos do linfoma em bovinos: 128 casos (1965-2013). Pesquisa Veterinária Brasileira 34(9):856-864. Departamento de Patologia, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: anemiaveterinaria@yahoo.com.br Por meio de um estudo retrospectivo, os aspectos epidemiológicos, clínicos e anatomopatológicos de 128 casos de linfoma bovino são descritos. Dos protocolos que informavam o sexo (n=111), 84,7% correspondiam a fêmeas e 15,3% a machos. Dos protocolos em que constava a raça (n=108), a mais prevalente foi a holandesa (63%). Em relação à idade (n=107), houve uma variação entre um e 14 anos. A maioria dos bovinos era adulta (89,7%) e a maior concentração dos casos ocorreu ao redor de 5-8 anos (57,9%). Em relação aos sinais clínicos (n=89), linfadenomegalia foi o achado mais frequentemente observado (74,1%). Outros sinais clínicos, principalmente aqueles relacionados com os sistemas respiratório (dispneia, estertoração pulmonar e taquipneia), cardiovascular (taquicardia, edema subcutâneo e pulso venoso positivo), digestório (atonia ruminal, timpanismo e diarreia) e nervoso (paresia dos membros pélvicos e andar cambaleante), foram pouco prevalentes. Na necropsia (n=125), 71,2% dos bovinos apresentavam aumento de volume dos linfonodos; essa linfadenomegalia foi classificada como localizada em 89,6% dos casos e generalizada em 10,3% dos casos. Dos protocolos que informavam os linfonodos acometidos (n=58), a distribuição foi a seguinte: mesentéricos (51,7%), mediastínicos (37,9%), pré-escapulares (29,3%), ilíacos internos (27,6%), inguinais superficiais (25,8%) e traqueobrônquicos (18,9%). Além dos linfonodos, outros órgãos comumente afetados pelo linfoma neste estudo incluíram: coração (40%), fígado (15,2%), rim (14,4%), abomaso (12,8%), útero (11,2%), intestino (10,4%) e pulmão (7,2%). A presença de massas tumorais no canal vertebral foi observada em poucos casos (3,2%). Com base na epidemiologia e na localização das lesões, a maioria dos casos (96%) foi classificada como linfoma enzoótico e o restante (4%) como linfoma esporádico. Os resultados encontrados neste estudo irão auxiliar clínicos de grandes animais e patologistas veterinários na suspeita e no diagnóstico definitivo do linfoma na espécie bovina.

Abstract in English:

A representative sample of blood from dairy cattle in the Sta te of Parana was tested for the presence of antibodies against the virus of enzootic bovine leukosis (EBL) and it was found that the general prevalence of the virus was 20.7%, in 40.8% of the surveyed farms. The higher prevalences of the virus were found in the areas of the State where the economic significance of dairy production is greater and this prevalence was also higher in the older animals and in those of the Holstein breeds.

• Enzootic bovine leukosis virus leukemia

Abstract in Portuguese:

Uma amostragem representativa de sangue do rebanho bovino produtor de leite do Estado do Paraná foi submetida à prova específica para verificação de anticorpos contra o vírus da leucose enzoótica bovina (LEB), tendo sido encontrado um índice geral de prevalência de 20,7% em 40,8% das propriedades pesquisadas. As maiores prevalências do vírus foram encontradas nas áreas do Estado onde a importância econômica da bovinocultura de leite é maior e esta prevalência foi maior nos animais mais velhos e naqueles das raças Holandesas.

• Leucose enzoótica bovina vírus leucemia

Abstract in English:

Fifty-five dairy cows from two herds located in the State of Rio de Janeiro, were evaluated monthly over a six month period for persistent lymphocytosis (PL) and for the presence of plasma antibody to the major glycoprotein (gp51) of bovine leukosis virus (BLV), as evidence of infection. Absolute lymphocyte counts were superimposed on Bendixen's hematological key for bovine leukosis. Animals were considered to have PL when, during the six month period, three absolute lymphocyte counts were above 7000 per mm3 of blood. In herd A, of 15 absolute lymphocyte counts from three antibody-negative cows, 13 (86.7%) were normal and two (13.3%) suspect. Counts from 17 antibody-positive cows from the sarne herd showed 29 (30.5%) normal, 36 (37.9%) suspect and 30 (31.6%) leukotic. In herd B, of 82 absolute lymphocyte counts from 14 antibody-negative cows, 45 (54.9%) were normal, 23 (28.1%) suspect and 14 (17.0%) leukotic. Counts from 21 antibody-positive cows showed that 53 (45.3%) were normal, 40 (34.2%) were suspect and 24 (20.5%) were leukotic. It is concluded that PL is an unreliable criterion to identify cattle infected with BLV in the subtropical environment, and must not be used in programs aimed at controlling or eradicating BLV from infected herds. However, the hematological keys will continue to be useful in the diagnosis of the clinical disease, that is, the bovine lymphosarcoma. The use of the immunodiffusion test to detect antibody to gp51 in the plasma or serum of infected cattle is a simple and sensitive tool in the control of BLV infection.

• Enzootic bovine leukosis virus persistent lymphocytosis antibodies glycoprotein

Abstract in Portuguese:

Cinqüenta e cinco vacas leiteiras de dois rebanhos localizados no Estado do Rio de Janeiro foram examinadas mensalmente, durante um período de seis meses. para determinar a linfocitose persistente (LP) e a presença, no plasma, de anticorpos contra a glicoproteina maior (gp51) do vírus da leucose bovina (VLB), como evidência da infecção. As contagens linfocitárias absolutas foram sobrepostas à chave hematológica de Bendixen para leucose bovina. Os animais foram considerados portadores de LP quando, durante o período de seis meses, três contagens linfocitárias absolutas estavam acima de 7000 por mm3 de sangue. No rebanho A, de 15 contagens linfocitárias absolutas de três vacas anticorpo-negativas, 13 (86,7%) eram normais e duas (13,3%) atingiram a faixa de suspeitas. De 95 contagens de 17 vacas anticorpo-positivas do mesmo rebanho, ,29 mostraram-se (30,5%) normais, 36 (37,9%) suspeitas e 30 (31,6%) leucóticas. No rebanho B, de 82 contagens linfocitárias absolutas de 14 vacas anticorpo-negativas; 45 (54,9%) eram normais, 23 (28,1 %) suspeitas e 14 (17,0%) leucóticas. As 117 contagens de 21 vacas anticorpo-positivas mostraram que 53 (45,3%) eram normais, 40 (34,2%) eram suspeitas e 24 (20,5%) eram leucóticas. Concluiu-se que a LP é um critério pouco confiável na detecção de bovinos infectados com o VLB num ambiente subtropical e não deve ser utilizada em programas que objetivam a controlar ou erradicar o VLB de rebanhos infectados. Porém, as chaves hematológicas continuarão sendo úteis no diagnóstico da doença clínica, o linfossarcoma bovino. Ficou também evidente que a prova de imunodifusão para detectar anticorpos contra gp51 no plasma ou soro de animais infectados é um método simples e sensível para o controle da leucose bovina.

• Leucose enzoótica bovina vírus linfocitose persistente anticorpos glicoproteina

Abstract in English:

Sixty cows out of a total of 482 animals imported from Uruguay by Dairy Cooperative of Curitiba (CLAC) were sampled in order to verify the presence of antibodies against enzootic bovine leukosis (EBL) virus in their blood. All cows were about 30 months old and many of them were calving for the first time. Eleven (18.3%) cows had antibodies against EBL virus in their plasma which were detected using the immunodiffusion test.

• Bovine leukemia enzootic bovine leukosis virus bovine

Abstract in Portuguese:

Sessenta vacas de um total de 482 animais importados do Uruguai pela Cooperativa de Laticínios de Curitiba (CLAC) foram amostrados com a finalidade de se verificar a presença de anticorpos no sangue contra o vírus da leucose enzoótica bovina (LEB). Todas as vacas tinham aproximadamente 30 meses de idade e muitas delas se apresentavam parindo pela primeira vez. Onze (18,3%) vacas apresentaram anticorpos contra o vírus da LEB quando testados pela prova de imunodifusão.

• Leucemia bovina leucose enzoótica bovina vírus bovino

Abstract in English:

The agar gel immunodiffusion tests performed in plates and on slides were compared in their efficiency to detect antibodies against the major glycoprotein gp51 of enzootic bovine leukosis virus (BLV). Materiais tested were milk, plasma and serum obtained from cattle belonging to seven dairy herds located in the States of Rio de Janeiro and São Paulo. Both tests were equally inefficient in the detection of antibodies in the milk. The plate immunodiffusion test was more sensitive than the slide test in the detection of antibodies in plasma, although, when the tests were performed with serum, both were equally sensitive in the identification of infected cattle. Out of a total of 1031 sera tested, 361 (35.0%) were identified as positive using the plate test, while the slide test detected 355 (34.4%) positives. It is concluded that- the slide inununodiffusion test can efficiently substitute for the plate immunodiffusion test in the detection of antibodies against gp51 of BLV in the serum, with the additional advantage of utilizing smaller amounts of glycoprotein antigen.

• Enzootic bovine leukosis virus plate immunodiffusion slide immunodiffusion

Abstract in Portuguese:

As provas de imunodifusão em ágar gel, realizadas em placa e em lâmina, foram comparadas quanto à eficiência em detectar anticorpos contra a glicoproteína maior gp51 rio vírus da leucose enzoótica bovina (VLB). As amostras testadas constaram de leite, plasma e soro, obtidos de bovinos pertencentes a sete rebanhos leiteiros dos Estados do Rio de Janeiro e São Paulo. Ambas as provas foram igualmente ineficientes na detecção de anticorpos no leite. A prova de imunodifusão em placa foi mais sensível que a prova em lâmina, na detecção de anticorpos no plasma, porém, quando as provas eram realizadas com soro, as duas eram igualmente sensíveis na identificação de bovinos infectados. De um total de 1031 soros testados, a prova em placa detectou 361 (35,0%) soros positivos enquanto a prova em lâmina 355 (34,4%). Concluiu-se que a prova em lâmina pode substituir a prova em placa eficientemente na detecção de anticorpos contra gp51 do VLB no soro, com a vantagem de utilizar menores quantidades de antígeno glicoprotéico.

• Leucose enzoótica bovina vírus imunodifusão em placa imunodifusão em lâmina

Abstract in English:

Whole blood, plasma and peripheral blood leukocytes from an adult cow with antibody to gp55 of bovine leukosis vírus (BL V), whose cultured leukocytes produced numerous type-C viral particles, and pools of milk from BLV-free and BLV-infected cows were assayed for infectivity in experimental transmission studies utilizing a calf bioassay. During an observation period of 6 months, the development of antibody to gp55 in the inoculated calves was considered as evidence of acquired infection with BLV. Whole blood inoculated subcutaneously in quantities that varied from 0.5ml to 8.0ml transmitted BLV to almost 50% of the calves. Peripheral blood leukocytes inoculated in quantities of 103, 104 and 105 per calf did not transmit BLV. However, 1 of every 2 calves inoculated with 106 and 107 leukocytes acquired the infection. Calves inoculated with plasma as well as uninoculated control calves did not become infecte d. Calves bom to BL V-free dams remained serologically negative after being inoculated intra-abdominally with a pool of milk from BLV-free cows and type-C viral particles were not observed in cultures of their leukocytes. Similar calves inoculated with a pool of milk from BLV-infected cows were all infected 3 months later and their cultured leukocytes contained small numbers of type-C viral particles. Four of 5 calves bom to BLV-infected dams remained serologically negative after the inoculation of a pool of milk from BLV-free cows. Conversely, 5 of 7 calves also bom to BLV-infected dams developed antibody to gp55 after being inoculated with a pool of milk from BLV-infected cows. It is concluded that BLV can be transmitted iatrogenically through the inoculation of fresh blood, that lymphocytes from infected animals produce type-C viral particles and are probably the cells responsible for infectivity, that there is no true viremia as shown by the lack of infectivity of plasma and that the milk from infected cows contains infectious BLV.

• Enzootic bovine Jeukosis virus transmission blood milk

Abstract in Portuguese:

Foi testada a infectividade de sangue total, plasma e leucócitos periféricos de uma vaca adulta com anticorpos para gp55 do vírus da leucose bovina (VLB), cujos leucócitos em cultura produziram numerosas partículas virais de tipo-C, e de misturas de leite de vacas livres e infectadas com o VLB, utilizando-se um bioensaio em bezerros. Durante um período de observação de 6 meses, o desenvolvimento de anticorpos para gp55 nos bezerros inoculados foi considerado como evidência de infecção adquirida com o VLB. Sangue total inoculado subcutaneamente, em quantidades variando entre 0,5ml e 8,0ml, transmitiu o VLB a quase 50% dos bezerros. Leucócitos do sangue periférico inoculados em quantidades de 103, 104 e 105 por bezerro não transmitiram o VLB, porém, 1 de cada 2 bezerros inoculados com 106 e 107 leucócitos adquiriram a infecção. Os bezerros inoculados com plasma assim como os bezerros testemunhas não inoculados não adquiriram a infecção. Bezerros nascidos de vacas livres do VLB permaneceram sorologicamente negativos após a inoculação intra-abdominal de mistura de leite de vacas isentas do VLB e não foram observadas partículas virais de tipo-C em culturas dos seus leucócitos. Bezerros similares inoculados com uma mistura de leite de vacas infectadas com o VLB estavam todos infectados 3 meses mais tarde e seus leucócitos em cultura continham um pequeno número de partículas virais de tipo-C. Quatro de 5 bezerros nascidos de vacas infectadas com o VLB permaneceram sorologicamente negativos após a inoculação de mistura· de leite de vacas livres do VLB. Por outro lado, 5 de 7 bezerros também nascidos de vacas infectadas com o VLB desenvolveram anticorpos para gp55 após a inoculação de mistura de leite de vacas infectadas com o VLB. Conclue-se que o VLB pode ser transmitido iatrogenicamente através da inoculação de sangue fresco, que os linfócitos de animais infectados produzem partículas virais de tipo-C e são provavelmente as células responsáveis pela infectividade, que não existe uma viremia verdadeira como foi determinado pela falta de infectividade do plasma e que o leite de vacas infectadas contém o VLB em estado infeccioso.

• Leucose enzoótica bovina vírus transmissão sangue leite

Abstract in English:

Tissue culture fluids containing enzootic bovine leukosis virus (BLV) and heparinized whole blood obtained from a virologically and serologically BLV-positive cow, were inoculated intra-abdominally into 14 water buffaloes (Bubalus bubalis). After eight months of observation, four buffaloes inoculated with blood had specific antibodies against the major glycoprotein (gp55) of BLV, as detected by the immunodiffusion test. Cultures of leukocytes isolated from the peripheral blood of the serologically positive buffaloes contained Type-C viral particles, confirming the experimental susceptibility of Bubalus bubalis to BLV. On the other hand, a survey for antibodies performed on the sera of 234 buffaloes did not provide evidence of natural infection with BLV. These results indicate that Bubalus bubalis is susceptible to experimental infection with BLV, but that BLV does not seem to cycle naturally in this species.

• Enzootic bovine leukosis vírus Bubalus bubalis buffaloes

Abstract in Portuguese:

Fluidos de culturas celulares infectadas com o vírus da leucose enzoótica bovina (VLB) e sangue total heparinizado obtido de uma vaca virologicamente e sorologicamente positiva ao VLB, foram inoculados intra-abdominalmente em 14 búfalos (Bubalus bubalis). Depois de oito meses de observação, quatro búfalos inoculados com sangue possuiam anticorpos específicos para a glicoproteína maior (gp55) do VLB, os quais foram detectados através da prova de imunodifusão para o VLB. Culturas de leucócitos isolados do sangue periférico dos búfalos sorologicamente positivos, continham partículas virais de Tipo C, confirmando-se assim, a susceptibilidade experimental de Bubalus bubalis ao VLB. Por outro lado, um levantamento para anticorpos realizado no soro de 234 búfalos, não forneceu evidência da infecção natural com o VLB. Estes resultados indicam, que Bubalus bubalis é susceptível à infecção experimental com o VLB, mas o VLB não parece circular naturalmente nesta espécie.

• Leucose enzoótica bovina vírus Bubalus bubalis búfalos